CRISPR-Cas9 sistemini önceki yazılarımda anlatmıştım. Gen knockout ı için kullanılan bu sistem, Crispr inteferance ve Crispr activation adında sistemlere uyarlanmış. Yöntemde, çift iplik kesim aktivitesi engellenmiş dCas9 (deactive Cas9) RNA-yönlendirmeli (single guide RNA) transkripsiyon kontrolü ile hedeflenen genomik bölgelere bağlanıyor böylece transkripsiyon susturuluyor ya da aktive ediliyor.
Crispr interferance sisteminin katalitik olarak aktif olmayan Cas9 kullanımına dayandığını söyledik bu da Cas9 u kodlayan genin katalitik rezidülerinde (D10A ve H840A) meydana gelen mutasyonla sağlanmaktadır.
Single guide RNA, üç bölgeden oluşuyor: 20 nt baz eşleşme sekansı, 42 nt dCas9 bağlanan hairpin, 40nt terminator. Sentetik sgRNA düzenleneceği zaman sadece 20 nt lik baz eşleşme kısmı modifiye edilmekte.
